酵母の形質転換法（酢酸リチウム法）

　酵母にプラスミドDNAを導入する方法としては、細胞壁を取り除いて行うスフェロプラスト法と、酢酸リチウム法がある。形質転換体の出現頻度は、スフェロプラスト法の方が10〜100倍高いが、手間がかかるのと熟練を要するため、一般的に、簡単な酢酸リチウム法が用いられている。しかし、ゲノムDNAライブラリーを形質転換する場合や遺伝子破壊を行う場合には、スフェロプラスト法を推奨する。

準備：

ＯＳＢバッファー（one step buffer）：作り置きはしない

0.2 ml ------ 1M LiAC
0.8 ml ------ 50% PEG 3400
25 μl ------- 4M DTT(dithiothreitol)(あらかじめチューブに入っている。)

方法：

1. 一晩あるいはそれ以上培養した宿主菌を1 mlとり、10000 rpm、1 min遠心する。
   *寒天培地上の菌を直接かき取って懸濁しても良い。
2. 沈殿を0.1 mlのＯＳＢバッファーに懸濁する。
3. DNAを2 μg（10 μl以内）加え、ボルテックスで懸濁する。
4. 45 min、43.5℃で処理する（パン酵母Saccharomyces cerevisiaeでは、45℃で処理する）。
5. 全量を最少培地にまく。

＊菌株によって異なるが、約３-７日でコロニーが現れる。