食物科学基礎実験（平成15年度）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 担当：　植　野

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 TA：　中　 岡

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 福　 山

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 李　 藤

 

微生物基礎編（微生物に親しもう）とネットワーク検索編

 

日程予定

1日目（6/2）講義（ガイダンス），器具の準備・洗浄

 

2日目（6/9）微生物の培地の調製，ネットワーク検索編開始

 

3日目（6/16）微生物の植菌，顕微鏡の準備・観察練習

 

4日目（6/23）微生物の形態観察（肉眼・顕微鏡観察）

 

5日目（6/30）ネットワーク検索

 

6日目（7/7）ネットワーク検索

 

7日目（7/14）実験室の片付け

 

 

 

 

I.　 微生物基礎編

 

【培地の調製】

 

細菌用培地

Glucose　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 0.5　 % (w/v)

Peptone　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 1

Meat extract　　　　　　　　　　　　　　　　 1

Yeast extract　　　　　　　　　　　　　　　　 0.2

NaCl　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 0.5

（Agar：固体培養　　　　　　　　　 2）

Tap water（水道水）　　 必要量

　pH 7.0〜7.5に（NaOH又はHCl希釈液，BTB試験紙で確認）

 

酵母・カビ用培地

Glucose　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 5　 % (w/v)

Peptone　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 0.5

Yeast extract　　　　　　　　　　　　　　　　 0.2

K2HPO4　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 0.4

KH2PO4　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 0.2

MgSO4・7H2O　　　　　　　　　　　　　 0.02

（Agar：固体培養　　　　　　　　　 2）

Tap water（水道水）　　 必要量

　pH 5.6〜5.8に（NaOH又はHCl希釈液，MR試験紙で確認）

 

 

【調整操作】

1. 試薬を秤量し，培地を調製する．

2. 培地のpHを調整し（1N HClまたは1N NaOHで），試験管に分注する．寒天を入れた培地についてはオートクレーブ（5分間程度）もしくは湯煎することで寒天が溶解するので，その後，分注すること．

3. 綿栓もしくはアルミキャップをした後，オートクレーブによって20分間加圧蒸気殺菌する（オートクレーブは，120 °Cに到達した時点で内部は1.2気圧になり，20分間その状態を保持する．その後，徐々に温度を下げる．温度が安全なところまで下がるまで蓋を開けないように！）

4. 固定斜面培地（スラント）を調製する場合は，寒天が固まるまで斜面に静置しておく（図1）．斜面培地を凝固した後，直立させると斜面の下部に凝縮水ができるが，これは菌の充分な生育増殖に重要な役目を持つ．シャーレでの固定培地を調製する場合は，寒天の上部に泡ができないようにする．バーナーであぶると泡は消える．


カビの観察には，スライド培養がよい（図3）．でも，必ずしもスライド培養に限らない．固定培地（図2）で培養し，その後，成長したカビの部分を白金耳を使ってピックし，スライドガラスに移して観察してよい．

 

（スライド培養の例）

【準備】

1. シャーレにろ紙（直径9cmの円形），ホールグラス，カバーグラス，つまようじ（4本）を入れて，新聞紙に包んで乾熱殺菌する．

2. パスツールピペット，ピンセットを新聞紙に包んで乾熱殺菌する．

 

【操作法】

1. オートクレーブしたカビ培養用培地（2%寒天を含む）を，乾熱殺菌済みのパスツールピペットを用いて，乾熱殺菌したカバーグラス上に一滴落とす．

2. カバーグラス上で固まった平板培地に白金耳を使ってカビを植菌し，ピンセットでカバーガラスをつまんで逆さまにして，シャーレ中に図3のように組み立てたホールグラスの上にのせる．

3. シャーレ中のろ紙に蒸留水を注いで，ふたをする．

4. 28 °Cで静置培養する．


5. ホールグラスごと取り出して顕微鏡のステージに置き，培地の端からカバーグラス上に伸びた菌糸を検鏡する．

 

 

（注意）本実験は週１回であることより，微生物の培養には特に注意が必要となる．つまり，1週間培養し続けると，繁殖しすぎたり，シャーレ中の湿気がなくなり（乾燥すること）寒天培地が乾燥したり，雑菌が繁殖したり，などいろいろな現象を経験することになる．培養サンプルは毎日こまめにチェックすること．それ以上成長をさせたくない場合は，培養容器ごと低温にて保存できる．（各自のグループ名なり，個人名を記入して，他のサンプルと区別できるようにすること）．

 

 

【使用微生物】

　細菌

　Escherichia coli　　　　　　　　　　　　　　　　 No. 3301

　 Bacillus natto　　　　　　　　　　　　　　　　　　 No. 0206

 

　 酵母

　Saccharomyces cerevisiae　　　　　　　 No. 2001

　 Saccharomyces sake　　　　　　　　　　　　 Kyokai No.7

　 Candida lipolytica　　　　　　　　　　　　　　 No. 1063

 

　カビ

　Aspergillus oryzae　　　　　　　　　　　　　　

 

 

II．　ネットワーク検索編（テキストはWeb上に用意するものを利用すること）

アドレス：http://www.nara-wu.ac.jp/life/food/mbio/class/index.html

忘れた場合は，応用微生物学研究室のon-campusのページにリンクされている

（http://www.nara-wu.ac.jp/life/food/mbio/on_campus.html）のでそこから入ること．

 

【目的】　Web上に公開されているデータベースを理解し，その機能を用いて情報検索の手法を会得することを目的とする．

 

 

III．レポート作成（A4サイズにて）

 

I．実験中の観察事項，その他の思いつき事項を記述する．

全体の考察もすること．

手法に関しては，実習の手引きに記載されていることは繰り返して書く必要はない．

ただし，変更したことなどがあれば記載すること．

II．与えられた課題のシークエンスに関して，調べたことをまとめる．ただし，Webのページを意味なく貼り付けたり，並べることは避けること．

 

【植野よりの忠告】学生実験は，将来自分がする研究活動に必要な基礎知識を身につける場である．実験の成果は，もちろん大切であるが，実験そのものには正解なるものはないと思うべし．自分が得た結果は事実である．その事実には，再現性があるのか，信頼性があるのか，その事実から何が導き出されるのか，などを問われていることを意識して欲しい．